细胞介绍

MV-4-11细胞系由Rovera课题组建立，来源于一名患有人双表型髓性单核细胞白血病（biphenotypic B myelomonocytic leukemia）的10岁男孩的外周血。Interleukin (IL)-3可以独立地支持该细胞长期生长，使用10%FBS培养时则不需要额外添加IL-3。但是，在IL-3和生长因子Granulocyte/Macrophage Colony-Stimulating Factor （GM-CSF）均处于低浓度的情况下，IL-3会抑制MV-4-11细胞的增殖。

生长因子Granulocyte Colony Stimulating Factor（G-CSF）会协同GM-CSF促进MV-4-11细胞的增殖，而单独的G-CSF会短暂刺激该细胞系。据文献[PubMed: 3500218]报道，间接免疫荧光法检测髓性单核细胞抗原CD15，超过96%的该细胞为阳性，40~96%为单核细胞抗原CD4阳性，4-11%为单核细胞抗原CD10阳性。

细胞特性

1） 来源：男性，10岁 外周血

2） 形态：成淋巴细胞状，悬浮生长

3） 含量：>1x10^6 细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5)  用途：仅供科研使用。

运输和保存

干冰运输及复苏好存活细胞

（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

细胞接收后的处理

1） 收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备IMDM（推荐iCell-0008）培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

备注：
a) 该细胞为悬浮细胞，传代时使用【半换液法】对细胞状态较为有利，因此我库建议您使用【半换液法】进行传代。如你收到的细胞为15ML离心管发货的细胞，请不要通过离心的方式收集细胞，可以直接向培养瓶中添加等体积的新鲜培养液，然后将细胞吹打均匀后移入两个新的T25培养瓶中继续培养即可。如你收到的细胞为T25培养瓶发货的细胞，通过离心收集细胞后，添加8-10ml按照要求配置的新鲜培养液然后将细胞吹打均匀后移入两个新的T25培养瓶中继续培养即可。

后续建议您使用【半换液法】进行传代。
b) 细胞对血清质量较为敏感，我库建议您使用进口大品牌优质血清进行培养。
c) 该细胞对细胞密度较为敏感，培养、传代时请注意保持细胞密度在合适的范围。细胞接种密度20万个/mL ，培养时维持细胞密度在10万-100万个/mL

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 冻存细胞的复苏：

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

悬浮状态下生长的细胞，可以通过向培养瓶中添加完全培养基来维持细胞的生长状态，一般情况下细胞密度维持在1×105~1×10^6个/mL（不同细胞对密度要求不同，）可以维持细胞的正常生长。如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中1000rpm，离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3） 细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

下面T25瓶为例；

1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10^6~1×107个活细胞/ml.

2. 1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×10^6~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。