为什么要进行支原体污染清除？

       支原体直径约为0.1-0.3 μm，具有变形能力，可透过常见过滤膜（0.22-0.45 μm），因此常规的无菌过滤方法不能将其去除，常用的抗生素也对支原体无效。支原体污染是细胞培养领域的一个世界性问题，世界各国细胞系支原体污染的平均比例为30-60%。支原体可通过细胞之间交叉污染，操作人员的口腔、皮肤造成污染，或者血清等添加物而带入污染。

 

       支原体在光学显微镜下不可见，一般不会引起培养物混浊，因此细胞被支原体污染一般难以察觉。支原体会消耗必须氨基酸，影响细胞生长速率，促进代谢物积累，改变细胞形态，影响 DNA、RNA 以及蛋白质的合成，抑制细胞因子表达，改变被污染细胞的基因表达谱，诱导染色体畸变。   

       从2013年开始，《Nature》期刊已正式要求投稿的文章，如涉及细胞培养都要进行支原体检测。以细胞为载体的科学研究，如果不能保证所用的细胞无支原体污染，则实验结果很可能是极端不可靠甚至是完全错误的！

       服务对象

       1. 实验室的种子细胞，如从ATCC、JCRB、DMSZ等国外权威细胞库采购的珍贵细胞系；
       2. 组织珍贵的原代细胞；
       3. 需要进行基因编辑的细胞；
       4. 各类干细胞（含iPS细胞）；

       5. 稀有细胞。

       服务内容

      1.根据客户提供的细胞名称、细胞代次、细胞类型制定细胞的支原体清除方案；
      2. 细胞STR鉴定（选做）；
      3. 支原体PCR法检测支原体污染程度；
      4. 细胞的支原体清除，一般污染单一支原体的清除时间为2周左右，感染多种支原体且非常严重的细胞，清除时间需要延长，约3-4左右；

      5. 2-3周后，再次进行支原体检测，如果细胞支原体清除干净，将换为支原体预防培养方案，继续维持一周左右时间。如未清除干净，则适当延长1-2周继续清除顽固支原体，2周后再次进行复检。

       服务周期与价格

       送样要求

      1. 复苏细胞（充液运输）：生长状态良好的细胞，待达70%-80%汇合时，去掉旧培养液换入新培养液，量要达到培养瓶的颈部（过满易污染），保留少许空间，旋紧瓶盖，避免空气过多运输中气泡运动易使细胞脱落。

      2. 冻存细胞（干冰运输）：将干冰提前置于塑料泡沫盒中，以最快的速度将细胞冻存管从液氮转入干冰中，用胶带封好泡沫盒，最好再外面加套一层纸盒，延缓干冰挥发。

       注：根据距离选择泡沫盒，泡沫盒壁的厚度不小于 50mm，内部空间不小于200× 200× 200mm，放入足量干冰。

      支原体清除案例

 

        如上图1所示，左侧为支原体污染的MCF-7细胞，右侧为支原体清除后的MCF-7细胞，倒置显微镜下可明显看出细胞间隙间黑点明显减少，细胞边缘清晰，状态良好。

 

        如上图2所示，左侧为支原体污染的Hep G2细胞，右侧为支原体清除试剂处理的Hep G2细胞。左侧有支原体污染的细胞样品可以观察到细胞核周围微粒状或丝状蓝色荧光。支原体污染严重的细胞可以观察到大量微粒状或丝状蓝色荧光。右侧细胞支原体污染被清除干净，仅观察到细胞核的蓝色荧光，证明支原体已被清除干净。

       注意事项

       1. 由于各个实验室细胞培养体系不同，且更换体系细胞会需要一段时间的适应，故本服务需客户自行提供足量的培养体系；
       2. 根据客户需求，STR鉴定服务为选做项目，赛百慷生物承诺对于支原体清除服务细胞进行单独隔离培养，客户为保证实验严谨性，可选择我司进行STR鉴定服务；

       3. 由于细胞随时可能会存在交叉的风险，只认可我司接收细胞后第一时间进行的STR鉴定结果；

      提供结果

      原始支原体PCR结果图片和无支原体污染的细胞（根据客户需要选择充复苏/冻存发货形式）。

     保密承诺

      我公司郑重承诺：客户提供产品的检测信息与数据，履行保密义务，未经客户许可，不得擅自公开发表或使用，不得泄露给第三方。